ELISA实验要想做的好

细节必不可少

细节到位

实验数据精准那不是分分钟的事情嘛

师兄师姐总结的干货

ELISA操作中遇到大问题全在这里了！

哈哈，有了这份笔记，

你就是下一个实验大佬

Q1：我的样本如何处理、收集、保存？有没有建议？

1. 血清样本

分离管分离血清。在1000g离心之前，使血样凝集30分钟。吸取血清样本之后即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

2. 血浆样本

EDTA、枸橼酸钠或肝素抗凝收集血浆样本。在血样收集30分钟内离心收集样本。即刻检测，或者分装，-20℃贮存。避免反复冻融。

注意：不要使用严重溶血或高血脂的样本。所有样本收集后，应及时分装并贮存于-20℃。如果在24小时内检测，样本可以存放在 2-8℃。避免样本的反复冻融。在分析前，冷冻样本应该缓慢的恢复至室温，轻柔地混匀。检测前，样本中可见的沉淀必须去除。

Q2：样本反复冻融， 对ELISA检测的影响有多大？

样本反复冻融对蛋白影响非常大，易导致蛋白降解；一般来说血清/血浆（蛋白含量丰富）样本冻融1-2次，影响不大；但是其他样本类型，比如细胞上清/肺泡灌洗液，冻融1-2次后，蛋白降解严重，不适合再用于ELISA

Q3：ELISA实验加完底物显色后，所有孔都无色，阳性对照也很弱，什么原因呢？

总结以上避免白板，ELISA操作应注意事项：

1、确认配制洗液的容器已洗干净，不含酶抑制剂，如叠氮钠等；

2、每次配制时都应看清标签标明物质；

3、加完试剂后可观察一下液面高度是否一致，以减少漏加现象。

Q4：ELISA实验标准曲线吸光值、梯度挺好，但是样本值不佳，样本浓度太低或太高？

Q5：ELISA实验加入显色底物后，标准品有颜色，但结果分析发现标准品最高点吸光值偏低或偏高、标准曲线无梯度？

1、标准曲线最高点吸光值偏高，超出仪器检测范围ELISA标准曲线最高点的吸光值一般在3.0以下，若太高超出仪器检测范围，显示OVER FLOW，可能原因：

2、标准曲线最高点吸光值偏低ELISA标准曲线最高点的吸光值一般要在0.8以上，若小于0.8，可能的原因：

3、标准曲线无梯度，ELISA 实验中标准品2倍倍比稀释，但结果分析标准曲线没有梯度，可能的原因：

ELISA实验步骤少，流程短，购买的ELISA试剂盒也都有指导性很强的操作说明书，单次实验3-6小时即可得到结果，实验小白也可以很快的上手。

但是，各位同学可不要这样就轻视哦~，ELISA和WB、IHC等基础免疫实验一样，都是易学难精，上手容易，但想要得到稳定的结果，不好好做些准备可是不行的哦~

文章出自：验外实包   想了解更多请关注：http://www.dj-cro.com/